Voordelen en nadelen van Western Blot

Western blot , een analytische techniek voor een specifiek eiwit lokaliseren in een monster , telt het vermogen van een enzym of fluorescerend gemerkt primair antilichaam bindt aan zijn specifieke antigeen . Het is een drie - staps proces startend met gelelektroforese , gevolgd door blotting membraan en probing met antilichamen . Protein detectie kan direct of indirect zijn , waarbij de laatste met een gemerkt secundair antilichaam gericht tegen de primaire . Hoewel aanvaard als een routine- eiwit analysetechniek , western blot heeft beperkingen en voordelen . Voordeel : Gevoeligheid

Een van de grootste argumenten voor western blot is de gevoeligheid . Vanwege zijn vermogen om slechts 0,1 nanogram eiwit in een monster te detecteren , kan de techniek theoretisch dienen als een effectieve vroegtijdige diagnose-instrument , aftasten zelfs de geringste immunogene reactie van een virus of bacterie in een patiëntmonster . Een indirecte western blot verder bouwt op deze gevoeligheid van het vermogen van het secundaire antilichaam aan de intensiteit van het gedetecteerde door het beeldvormingssysteem signaal te versterken . Grotere gevoeligheid betekent dat minder antilichamen nodig zijn voor het testen , die aanzienlijk vermindert laboratoriumkosten
Voordeel : . Specificiteit

De Western Blot- techniek dankt zijn specificiteit aan twee grote bijdragende factoren . Eerst gelelektroforese sorteert een monster in eiwitten van verschillende grootte, lading en conformatie . Dit proces is op zich een grote stap detectie banden zijn gevormd in de gel al aanwijzingen geven over de grootte van het eiwit of polypeptide van interesse. De specificiteit van de wisselwerking antilichaam - antigeen dient als tweede grote factor . Omdat specifieke antilichamen vertonen affiniteit voor specifieke eiwitten , kan het proces selectief een doelwit eiwit te detecteren , zelfs in een mengsel van 300.000 verschillende eiwitten
Nadeel: . Vaak vals of Subjectieve Resultaten

ondanks de gevoeligheid en specificiteit , een western blot nog produceren foutieve resultaten . Een vals - positieve resultaten bij een antilichaam reageert met een onbedoelde eiwit , wat vaak voorkomt wanneer een patiënt getest op HIV toevallig tuberculose of een aantal parasitaire infecties . Een vals - negatief , anderzijds , kan gemakkelijk leiden als grotere proteïnen niet voldoende tijd om goed te dragen aan het membraan worden gegeven . Oneigenlijk blotting en verwerking produceren vaak scheef , vaag of zelfs meerdere banden , waardoor de testresultaten aan de interpretatie van de technicus onderwerp
Nadeel: . Hoge kosten en technische Demand

de kosten van een Western blot is een samenstelling van de afzonderlijke grote uitgaven voor tag antilichamen geschoolde analisten en laboratoriumapparatuur . Een delicaat proces , western blotting vereist precisie in elke stap voor een goede identificatie van de bestanddelen van een monster . Een kleine fout in reagens concentratie of in incubatietijd kan desastreus zijn voor het gehele proces. Tot slot , het nodig voor de detectie en beeldapparatuur - chemieluminescente , fluorescerende , radioactieve , of laser detectie systemen - kan te duur voor de gemiddelde microbiologie eenheid

.